病请描述：肾病🌿 👉如果说将肾拟物化，我想可以将其比作净化器，通过过滤和重吸收，把代谢的无用之物排出体外。但当这台“净化器”出现问题时，“环境”得不到净化，就容易影响到健康。 . 👉虽然很多时候，肾疒是沉默不语的，但有部分肾友可能会有不适的表现！ . ✅慢性肾疒常见表现： . 1、水肿 比如早晨起床眼睑或面部水肿，随着疒情的进一步加重，可能变成全身水肿。 . 2、出现泡沫尿 小便泡沫多且不易消散，这可能是尿液中含的蛋白质较多，也是慢性肾疒的一大表现。 . 3、尿量过多或过少 . 4、夜尿增多 . 5、血压升高 . ✅饮食注意： 1、根据自身情况，控制蛋白摄入 2、低盐饮食 3、慎食高钾食品 4、尽量不吃高嘌呤食物 5、忌食辛辣刺激性食品 6、不要暴饮暴食 . ✅避免发展成尿毒正，日常做好3点： . 1、避免感染的发生 对于慢性肾疒来说，每发生一次感冒或是感然，都是“雪上加霜”，很可能会加速肾疒的进一步发展。 . 2、避免过度劳累 比如体力劳动、剧烈运动等，都是疒情加重的重要原因之一。 . 3、控制好尿蛋白 首先是进行积极的药物冶疗，其次是调整饮食方式，注意低蛋白饮食。 . 4、控制和稳定好血压 肾疒与高血压关系密切，长期的肾损伤会导致高血压，而血压控制不好也容易引起肾损害。#肾病
王海颖 2024-08-26阅读量1274
病请描述：肌酐☘ ❗肌酐100多严不严重，该怎么冶疗，可以恢复吗，会发展到尿毒症吗...这是肌酐100多的肾友经常会询问的问题。 - ❗首先，要先确认下到底有没有肾损伤，每个人的体质和具体情况不同，比如有些比较强壮的男性，或是肉吃多了、运动量比较大的人，可能会出现肌酐稍微高于正常范围的情况，这就需要综合考虑引起肌酐升高的具体因素了，如果不放心，可以做进一步的检查，来更准确的判断下是否有肾损伤。具体的建议由醫生来诊断，切勿自行盲目定论。 - 👉一般来说，肾疒早期肌酐可能不会太高，有些可能肌酐稍微超标一点，但是又不会超太多，大概就是100多一点。 - 👉如果是属于轻度的损伤，部分肾友有可能恢复正常。所以一定要积极冶疗，千万别拖，如果放任不管，等到疒情进一步发展，不仅冶疗起来会更加棘手，冶疗效果也可能有着很大的差别。 - ❤❤在日常生活上： 1、饮食少油炸、少盐、少辛辣 2、保证充足睡眠 3、适当运动，比如散步、快走、打太极拳等 4、别劳累，不管是身体上的劳累还是精神上的劳累 5、保持心情愉悦 #肌酐#肌酐高#尿酸
王海颖 2024-08-26阅读量1255
病请描述： 痛风不疼了，就能停药了？很多朋友是不是都有这种想法，是药三分毒，痛风不痛了就不用治了，这是严重错误的观念。 痛风患者的降尿酸治疗是一场全身参与的持久战，不遵医嘱擅自停药会引起尿酸水平快速升高，诱发痛风反复无常的发作，门诊中很多痛风十多年的老患者都因为治疗初期，用药时断时续导致耐药，无奈只能加大剂量造成严重肝肾损伤。老百姓的话讲就是按下葫芦起了瓢。而且，长期控制不理想的尿酸盐结晶不仅会沉积在肾脏，引起尿路结石、慢性肾功能不全，后期诱发肾功能衰竭尿毒症。 同时，长期高尿酸痛风还可并发加重糖尿病、冠心病、中风、高血压等疾病。痛风患者应在中西药物控制的基础上，同时改善生活方式，定期复查尿酸指标，谨遵医嘱灵活调整药物剂量，最好是在不伤肝肾功能的情况下，控制尿酸达到合格数值。
杨宁 2024-08-09阅读量1630
病请描述：自然·纳米技术: 成都科学家开发出治疗动脉粥样硬化新方法 四川大学华西医院重症医学研究所研究员宋相容 (Xiangrong Song) 团队联合哈佛大学医学院教授陶伟 (Wei Tao) 团队开发了一种新型药物递送系统，为治疗动脉粥样硬化提供了一种新的方法，研究论著近期发表在《自然—纳米技术》(nature nanotechnology) 上，该系统将来还有望用于治疗其他炎症性疾病。 动脉粥样硬化中斑块的堆积会导致心血管事件，慢性未消散性炎症和活性氧（ROS）的过度产生是斑块进展的主要驱动因素。可以消退炎症和清除ROS的纳米疗法具有治疗动脉粥样硬化的潜力。 在上述研究中，展示了黑磷纳米片（BPNSs）作为治疗动脉粥样硬化的治疗剂的潜力。BPNSs可以有效地清除广泛的ROS，并抑制病变巨噬细胞中与动脉粥样硬化相关的促炎细胞因子的产生。 研究团队还演示了基于ROS反应、靶向肽修饰的BPNS载体，用于将resolvin D1 (TIPS: 一种炎症溶解脂质介质，国内有称其为”消退素 D1“) 输送到病变巨噬细胞，这进一步提高了抗动脉粥样硬化的功效。 靶向纳米疗法不仅减少了斑块面积，还大大改善了高脂肪饮食喂养的载脂蛋白缺陷小鼠的斑块稳定性。 这项研究提出了一种治疗动脉粥样硬化的治疗策略，并强调了基于BPNS的治疗方法治疗其他炎症疾病的潜力。 BPNSs@PEG-S2P/R的合成策略及抗动脉粥样硬化机制示意图。 该研究背景与相关信息 慢性未消散性炎症是动脉粥样硬化的关键驱动因素，动脉粥样硬化的特点是逐渐沉积动脉斑块，最终可能导致动脉粥样硬化事件。因此，抗炎策略已成为临床环境中有前途的治疗方法。 正如最近的一项临床试验所强调的那样——卡纳金单抗抗炎血栓形成结果研究（CANTOS）——涉及约10,000名心肌后梗死患者，使用卡那金单抗治疗，这是一种可以中和促炎性IL-1β细胞因子的单克隆抗体，显著减少了心血管事件的数量。 然而，尽管有希望，但该方案也增加了致命感染的数量，主要是由于宿主防御受损，因为中性粒细胞减少症比安慰剂队列更常见。另一项临床试验——心血管炎症减少试验（CIRT）——表明，使用低剂量甲氨蝶呤（一种抗炎药物）进行全身治疗，未能减少促炎细胞因子的表达或心血管事件。 这两项临床试验的治疗结果表明，向动脉壁的病变区域有效提供治疗药物可以大大提高治疗效果，并最大限度地减少不良反应。 病变巨噬细胞中活性氧（ROS）的过度生产是动脉粥样硬化进展的另一个关键因素，通过增加氧化应激，导致细胞凋亡，以及激活炎症反应。此外，促炎巨噬细胞产生的局部炎症与ROS过量产生有关。 由于炎症是动脉粥样硬化过程中ROS过量产生的一个致病因素，因此解决炎症和抑制病变ROS产生以提高治疗效果的治疗策略-尽管具有挑战性-对动脉粥样硬化管理具有相当大的兴趣。 尽管临床前研究表明，一些纳米疗法具有双重治疗功能，但挑战仍然是它们在疾病部位的低积累、复杂的合成途径和潜在的毒性，这可能会阻碍临床翻转化。 因此，迫切需要合成不仅具有抗氧化和抗炎功能，而且具有增强在疾病部位积累的生物相容性纳米材料。 二维（2D）黑磷纳米片（BPNS）因其独特的物理化学特性和卓越的生物相容性而在纳米医学领域得到了广泛研究。最近的一项临床前研究表明，BPNS可以有效地清除多余的ROS，以改善急性肾损伤。 鉴于这一范式，上述研究团队开发了基于BPNS的生物相容性靶向纳米疗法，不仅改善了病变巨噬细胞的积累，而且能够清除ROS和消退动脉粥样硬化斑块的炎症，解决以前的缺点。 与涉及纳米载体输送药物的传统策略相反，该团队开发了一种创新的“纳米输送药物”方法来治疗动脉粥样硬化。 具体来说，他们利用BPNS的药物携带能力来加载 resolvin D1 (RvD1)，这是一种在易损动脉粥样硬化斑块中缺乏的消炎脂质介质。 虽然RvD1负载的BPNSs清除了周围的ROS，但BPNSs的降解在病变巨噬细胞中选择性地释放RvD1，从而提高了动脉粥样硬化的载脂蛋白E-缺陷（Apoe-/−）小鼠模型中的抗动脉粥样硬化功效。 利用靶向肽修饰和促炎提示反应药物输送纳米平台，这种增强的治疗策略不仅有效地改善了动脉粥样硬化斑块中的氧化应激，而且还有效地向Apoe-/-小鼠的病变巨噬细胞提供了促炎症消退药物，突出了其治疗动脉粥样硬化和其他炎症疾病的前景。 该黑磷靶向纳米药物在多种AS动物模型中不仅能减少斑块面积，而且能显著提高斑块的稳定性，表现出良好的可重复性和非模型依赖性。 重要的是，研究团队利用放射化学、流式细胞术、近红外成像和组织学等方法，系统地研究了BPNSs@PEG-S2P/R在AS模型小鼠体内的药代动力学、生物分布以及在AS斑块和血管细胞内的积累与相互生物作用等。 研究团队对斑块内巨噬细胞进行单细胞RNA测序分析，探究了该黑磷靶向纳米药物治疗动脉粥样的潜在机制。 结果表明，该靶向药物可能主要通过调节相关基因或信号通路的表达，诱导巨噬细胞炎症和氧化应激消退，从而表现出优异的疗效。
吕平 2024-07-25阅读量1586
病请描述：什么是偏头疼？ 偏头痛（migraine）是临床最常见的慢性神经性疾患之一，临床以发作性中重度、搏动样头痛为主要表现，头痛多为偏侧，一般持续4-72小时，可伴有恶心、呕吐，光、声刺激或日常活动均可加重头痛，安静环境、休息可缓解头痛。 偏头痛是一种常见的慢性神经血管性疾患，多起病于儿童和青春期，中青年期达发病高峰，常有遗传背景。鋤勺15-20%的人趟偏头痛的折磨。 什么是隐匿性脑卒中？ 心脏问题为什么会导致 偏头疼和脯卒中？ 隐匿性脑卒中(concealedstroke,CS)也称无症状脑卒中、沉默性脑卒中。通常颅脑一定功能部位出现卒中会引起相应临床表现，但有时卒中出现的部位在临床上无相应的表现或临床症状轻微，这类卒中称之为隐匿性脑卒中。包括隐匿性脑梗死、隐匿性脑出血及隐匿性蛛网膜下腔出血。其中隐匿性脑梗死约占74%,隐匿性脑出血占21%,隐匿性蛛网膜下腔出血占5%。 CS的存在可能会导致脑卒中病情恶化，病死率增高，并增加脑卒中复发的危险性。CS的早期诊断和治疗可改善预后。 卵圔孔未闭(PFO)：正常人群中约有1/4的人先天存在一种轻微的心脏结构缺陷。卵圆孔位于左右心房之间的隔膜中部。正常的卵圆孔应完全闭合，完全隔绝左右心房各自储存的血液。 约有1/4的成年人，其心房间的卵圆孔并未完全闭合。正常情况下，左心房中的血压大于右心房，卵圆孔即使没有闭合，也会被左心房的压力压紧，从而不会产生心房间反常的血液流动。因此卵圆孔未闭往往不会产生明显的临床症状，不易被发现。 然而，当存在卵圆孔未闭缺陷的人偶尔咳嗽或屏气的时候，由于肺循环血压暂时升高，右心房中的血液将会顶开卵圆孔，并少量倒灌到左心房中。更为严重的是，在静脉血中还相对安全的血液栓子，也随之倒灌到了左心房中，成为了极其危险的“定时炸弹”。这些进入左心房的静脉栓子，将随动脉血进入全身各处，流向脑部的栓子将会引发脑血管栓塞，导致偏头痛，严重时甚至会导致反常栓塞和脑梗死。 如何确定是否存在卵圆孔未闭？ PFO临床上常用经颅多普勒超声声学造影(cTCD)和经食道超声心动图(TEE)来进行诊断。经颅多普勒超声声学造影(cTCD)即“发泡试验诊断过程中医生向患者注射制备的激活盐水，静息时静脉注入盐水，然后嘱患者行 Valsalva动作，进而观察脑部是否能检测到微栓子信号，从而确定患者心脏内是否存在有右向左分流的卵圆孔未闭。(PS：虽然“发泡试验”可以推断是否有PFO,但并非直接观察到PFO的形态，因此还需要经食道超声的辅助。) 经食道超声心动图：也称经食管超声检查，具有不依赖患者体型和经胸声窗条件差的优势，可以清楚、精准得测量卵圆孔的大小、长度、识别房间隔的精细结构，还可以评价左心耳结构辅助判定血栓来源。通过以上各项检查，可以检查出PFO,并观察PFO的大小、形态、分流程度以及毗邻结构。 如何对卵圆孔未闭进行治疗？ 卵圆孔未闭一般进行介入治疗。在X线、超声等的引导下，将心导管沿股静脉上溯到卵圆孔部位，并使用特制器材对病变实施封堵。 超声引导PFO介入封堵术： 以往主要采用传统手术治疗或X光引导下经皮介入封堵，但是目前更为微创和安全的方式是超声引导下的介入封堵。超声引导介入封堵的过程通俗的讲就是从腿上或颈部的血管穿一个管子到心脏里，到心脏之后释放一个封堵器，用封堵器把缺损堵上，整个操作过程都是在超声监控和指导下进行，超声引导封堵术优点非常明显：这种方法创伤非常小，伤口只有米粒那么大，患者避免了X线所造成的伤害，不用担忧造影剂过敏和肾损伤，住院时间短，恢复快，深受患者及家属的欢迎。 超声引导下先心病介入治疗的优势 ❶不开刀、不用吃射线、不使用造影剂、创伤小、无痛苦、不留疤痕。 ❷操作在手术室执行，若封堵条件欠佳可直接转为外科手术，保证了操作的安全性。 ❸效果明确，可以达到与外科相同的根治效果，且费用相当。 ❹术后恢复快，住院时间短，不影响学习工作。 植入的封堵器是什么样的？ 卵圆孔未闭封堵器主要由镍钛合金丝状材料经精密加工制成，和人体组织高度亲和，无毒无害，可在植入即刻、完全、永久地封闭卵圆孔，彻底杜绝这一致病患。 卵圆闭封堵器手朮是否会对患者造成麻烦？ 这是一种类似冠心病介入治疗的手术，其手术过程简单，方法成熟、仅需局部麻醉，术后2-3天即可出院。并且仅在股静脉穿刺下进行，未留切口，对曰后的工作生活无任何影响，不留疤痕。 术后的服药及随访 ❶术后常规低分子肝素抗凝48h，口服阿司匹林 100mg6个月+氯吡格雷75mg3个月 ❷术后1个月、3个月、6个月和1年应复查TTE及心电图（标准复查项目） ❸术后6个月“发泡试验”复查
肖健 2024-06-17阅读量1335
病请描述：成年人中，约20-25%存在卵圆孔未闭（PFO），是成年人中最为常见的先天性心脏异常。近年来，越来越多的研究证明，PFO与不明原因脑卒中有密切的关系。通过PFO封堵术，可以明显减少高危人群中偏头疼、脑卒中的发生率。 病例1，女性，59岁，安徽省六安市人，因“反复偏头痛”就诊。经心超及右心声学造影发现PFO。完善检查下，在经心超引导下，行PFO封堵术，自右侧股静脉穿刺，送入18号PFO封堵器。目前随访两年多，恢复很好，无偏头疼、脑梗等发作。 病例2，女性，37岁，浙江省泰州市人，因“反复头疼2年，脑梗3个月”就诊。经心超及右心声学造影发现PFO。在心超引导下，经股静脉植入18号PFO封堵器。患者术后当天，即感觉头痛明显好转，压抑的心情也随着缓解了。 食道超声心动图引导下经皮PFO封堵术是近年来出现的一种新型治疗方法，其方法类似于X线透视引导的方法，只是操作全程在TEE引导下进行，对患者和手术医生均无X线电离辐射。该方法的优点是可以直接观察PFO的大小、形态、位置和分流方向，以及是否合并房间隔膨出瘤等，并可以实时评估封堵器的位置和效果，避免了X线透视下的辐射损伤和造影剂的肾损伤
张步升 2024-05-20阅读量1060
病请描述： 在医学领域，酪氨酸激酶抑制剂（TKI）是一类重要的药物，它们被广泛用于治疗由致癌基因驱动的肺癌。其中，有一类特殊的TKI被称为MATE-1抑制剂，它们包括那些靶向RET、ALK、MET、ROS1等基因突变的药物。这些MATE-1抑制剂通过抑制特定的酪氨酸激酶活性，从而阻断肿瘤细胞的生长和扩散。 然而，尽管这些MATE-1抑制剂在治疗肺癌方面展现出了显著的效果，但它们也可能产生一些副作用。一个主要的副作用就是它们会抑制MATE-1的功能。MATE-1是一种负责将药物和毒素从肾脏排出的转运蛋白。当MATE-1受到抑制时，它无法正常完成其工作，导致一些物质（如肌酐）在血液中积累。 肌酐是评估肾功能的一个关键指标，当其水平升高时，通常会让人担心可能存在肾功能受损的问题。但实际上，这种情况往往是由MATE-1抑制剂引起的药物效应，而非真正的肾脏损伤。目前临床上使用的MATE-1抑制剂包括赛普替尼、普拉提尼、克唑替尼、赛沃替尼等药物，它们在治疗肺癌时都可能影响到MATE-1的功能。 最近的一项研究表明，在使用MATE-1抑制剂治疗的肺癌患者中，当使用胱抑素C这一生物标志物来评估肾小球滤过率（GFR）时，得出的结果往往比传统方法更高。这意味着，当检测到患者血清肌酐水平升高时，医生可能需要重新考虑评估肾功能的方法。除了胱抑素C，有条件的医疗机构还可以采用碘海醇实测肾小球滤过率（mGFR）来了解肾功能的真实情况。这种方法通过注射碘海醇后测量其在体内的清除率，可以更准确地评估患者的肾小球滤过功能。 因此，当接受MATE-1抑制剂（如赛普替尼、普拉提尼、克唑替尼、赛沃替尼等）治疗的肺癌患者出现血清肌酐水平升高的情况时，我们建议在寻找其他可能导致肾脏损伤的原因之前，除了使用胱抑素C来重新计算肾小球滤过率外，有条件的医疗机构还可以考虑采用碘海醇实测肾小球滤过率（mGFR）来更全面地了解患者的肾功能状况。这有助于更准确地评估患者的肾功能，避免不必要的恐慌和过度治疗。 总的来说，虽然MATE-1抑制剂在治疗肺癌方面发挥了重要作用，但我们也需要注意其可能带来的副作用。通过科学的方法和手段来评估肾功能，我们可以更好地保障患者的安全和治疗效果。 备注：上海第九人民医院肾脏科提供碘海醇实测肾小球滤过率（mGFR）检测。 参考文献： 1. Clin Kidney J. 2024 Jan 12;17(1):sfae006. 2.J Thorac Oncol. 2024 Jan;19(1):153-159.
潘瑜 2024-04-22阅读量1050
病请描述：输尿管软镜目前作为肾结石手术治疗的方法之一，越来越受到大家的重视和欢迎。但很多患者对于反反复复入院出院而感到困惑。 目前输尿管软镜主要步骤包括： 01 置入输尿管导管； 02 1-2周后入院进行输尿管软镜手术； 03 术后1-2周复查-可能再次行输尿管软镜手术； 04 术后1-2周拔除输尿管导管。 很多人觉得这样很麻烦，那这样做的优缺点在哪呢？ 01 对肾脏损伤可能性小，减少肾萎缩的并发症； 02 输尿管损伤几率低，减少输尿管狭窄的并发症； 03 通过各种器械也可以清除肾脏结石； 04 可以反复手术； 05 出血少； 06 一定要告诉家长住院时间短（日间），术后恢复快。 但： 01 反复住院，前后约一个月； 02 输尿管置管容易出血感染； 03 可能会产生石街，反复手术； 04 多次手术费用相对较高。 EN专 家 介 绍
侯剑刚 2024-04-16阅读量1222
病请描述：氧化应激和炎症在糖尿病并发症，包括糖尿病肾病中起重要作用。金属硫蛋白(MT)在糖尿病肾近端小管上皮细胞中作为抗氧化剂被诱导;然而，MT在肾功能中的作用尚不清楚。因此，我们研究MT缺乏是否通过氧化应激和炎症加速糖尿病肾病。注射链脲佐菌素诱导MT-t缺失小鼠(MT X/X)和MT-t/MT-t小鼠发生糖尿病。测量尿白蛋白排泄、组织学变化、活性氧(ROS)标志物和肾脏炎症。小鼠近端小管上皮细胞(mProx24)被用来进一步阐明MT在高糖条件下的作用。与糖尿病MT相比，糖尿病MT X/X小鼠的糖尿病肾病参数、ROS和炎症标志物加速，尽管血糖水平相当。MT缺乏加速了糖尿病肾间质纤维化和巨噬细胞向间质浸润。电镜显示糖尿病MTX/X小鼠近端小管上皮细胞线粒体形态异常。体外研究表明，在高糖条件下培养的mProx24细胞中，小干扰RNA敲低MT可增强线粒体ROS的产生和炎症相关基因的表达。本研究结果表明，MT可能在糖尿病肾病中保护肾脏免受高糖诱导的ROS和随后的炎症作用中发挥关键作用。糖尿病肾病;炎症;金属硫蛋白;氧化应激;糖尿病肾病是终末期肾脏疾病的主要原因，也是心血管疾病的独立危险因素(10,25)。糖尿病肾病的发生和发展有多种机制，包括遗传和血流动力学因素、氧化应激、大量研究表明，高血糖与活性氧(ROS)的生成增强有关，氧化应激与糖尿病肾病的发生有关(6,7)。新出现的证据也表明，炎症途径在糖尿病肾病的发病机制中起着至关重要的作用(20,26)。因此，氧化应激和炎症的调节可能是糖尿病肾病的主要治疗靶点。金属硫蛋白(MT)是一种细胞内金属结合蛋白，其特点是低分子质量(6-7kda)，高半胱氨酸含量(61-62个氨基酸中的20个)，没有芳香或组氨酸残基(30)。虽然已经鉴定了四种同种异构体，但MT-1和-2(MT-1/-2)作为主要同种异构体广泛分布于全身(30)。MT在重金属解毒和必需金属稳态中起重要作用(24)。此外，MT具有强大的抗氧化功能，是一种保护细胞和组织免受氧化应激的适应性蛋白(2,9)。先前的研究报道了MT对帕金森病小鼠模型的神经保护作用(5,17,18)。我们最近证实MT主要在肾近端小管上皮细胞中表达，高糖诱导的氧化应激可增强糖尿病肾脏中MT的表达(21)。这些结果表明，MT通过代偿上调来保护肾脏免受糖尿病引起的氧化应激的影响;然而，MT在糖尿病肾病发病机制中的作用仍然知之甚少。因此，本研究旨在研究MT在糖尿病条件下保护肾脏免受高糖诱导的氧化应激的作用，使用MT缺乏(MT X/X)和MT/X小鼠。我们还使用正常或高糖条件下培养的小鼠近端小管上皮(mProx24)细胞来确定小干扰RNA(siRNA)敲低MT是否会诱导线粒体ROS，从而导致炎症。 材料和方法 实验性的协议。雄性纯合子MT-1/2敲除小鼠(MT实验性的协议。雄性纯合子MT-1/2敲除小鼠(MT X/X)来自Jackson Laboratory(Bar Harbor,ME)。 MT X/X小鼠在129/Sv遗传背景下饲养，因此129/ Sv小鼠被用作野生型对照(MT/Sv)。所有程序均按照冈山大学医学院动物实验指南、日本政府动物保护和管理法(第105号)和日本政府动物饲养和安全通报(第6号)进行。8周大的小鼠分为四组:1)非糖尿病 MT/MT小鼠(ND-WT;N (7);2)链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病MT (DM-WT);N (7);3)非糖尿病MTX/X小鼠(ND-KO;N (7);4)糖尿病MTX/X小鼠(DM-KO;n<e:1>7).糖尿病被诱导并证实如先前报道(15)。所有的老鼠都可以免费获得标准的饮食和自来水。小鼠在诱导糖尿病后12周被安乐死。取下肾脏，称重，用10%福尔马林固定，进行周期性酸-甲基苯丙胺银(PAM)和马松三色染色。剩余组织的部分被嵌入最佳切割温度化合物(Sakura Finetechnical，东京，日本)，并立即在丙酮中冷冻，在干冰上冷却。其他组织在液氮中快速冷冻，并在X80°C下保存。为探讨STZ对糖尿病肾病的影响，将8周龄MT X/X小鼠分为3组:1)非糖尿病小鼠(ND-K0;N (5);2) stz诱导糖尿病小鼠(DM-K0;N (5);3)甘精胰岛素治疗stz诱导的糖尿病小鼠(DM-KO2glargine;n5).使用甘精胰岛素(Sanofi, Tokyo,Japan)。5:0。腹腔注射8u/体。小鼠在诱导糖尿病后12周被安乐死。取出肾脏，用10%福尔马林固定，进行PAM染色。代谢数据。12周时测量体重、肾脏重量、糖化血红蛋白、血清肌酐和24小时尿白蛋白排泄(UAE)。糖化血红蛋白用高压液相色谱法测定，血清肌酐用酶法测定。收集尿液24h，将每只小鼠单独置于代谢笼中，随意提供食物和水。阿联酋的测量方法如前所述(22)。光学显微镜。切片经PAM和马松三色染色分析。在糖尿病诱导后12周，通过高倍镜检查每只动物皮质中随机选择的10个肾小球(x400)来估计肾小球的大小。使用Lumina Vision软件(Mitani, Tokyo, Japan)测量肾小球簇和间质纤维化的面积。系膜基质指数(mesangial matrix index, MMI)定义为簇毛面积中pam阳性面积，计算公式为:MMI<e:1>(pam阳性面积)/(簇毛面积)。结果表示为平均值↑SE(每m2丛面积;MMI的任意单位)。 lmmunoperoxidase染色。免疫过氧化物酶染色如前所述(22)。简单地说，用低温恒温器切割4米厚的新鲜冷冻切片。使用大鼠抗小鼠单核细胞/巨噬细胞(F4/80)单克隆抗体(Abcam,Cambridge,UK)评估巨噬细胞浸润，然后使用生物素标记的山羊抗大鼠 lgG抗体(Jackson ImmunoResearch Laboratories, West Grove,PA)。使用Vectastain Elite试剂盒(Vector Laboratories, Burlingame, CA)对切片进行亲和素-生物素偶联反应。计数每只动物10个肾小球中f4/80阳性细胞数。每个肾小球和间质组织的平均阳性细胞数(每mm2的数量)用于估计。Immunofluorescent染色。免疫荧光染色如前所述(21)。采用兔抗mt抗体(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)和Alexa Fluor 488驴抗兔IgG(Invitrogen, Carlsbad, CA)检测 MT-1/ 2在肾脏中的表达。为了确定MT-1/2是否定位于近端或远端小管上皮细胞，分别用山羊抗水通道蛋白-1(AQP1)抗体(Santa Cruz Biotechnology)或山羊抗tam - horsfall蛋白(THP)抗体(Santa CruzBiotechnology)反染色，然后用Alexa Fluor 594驴抗山羊lgG (Invitrogen)反染色。对于其他免疫荧光染色，抗IV型胶原(Millipore,Temecula, CA)，抗纤维连接蛋白(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)和抗4-羟基烯醛(4-HNE;Abcam)被使用。荧光显微镜(BX51;奥林巴斯，东京，日本)。Western blot分析。如前所述进行 Western blotting(15)。简单地说，蛋白质被洗脱，用SDS-PAGE分离，并转移到硝化纤维素膜上。在20 mM Tris·HCl (pH 7)中阻断后。6)含150mm NaCl,0。1% Tween 20和5%(wt/vol)脱脂牛奶，用抗纤维连接蛋白(Sigma-Aldrich)和抗磷酸化nf-b-p65 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA)孵育膜。将膜与anti-actin(Abcam)杂交以监测不同车道的等效负载。所有实验至少重复三次。电子显微镜。电镜下的组织准备如前所述(22)。近端小管上皮细胞在x1,500和x4,000显微镜下拍照。肾皮质基因表达的定量分析。治疗12周后，使用RNeasy Mini试剂盒(Qiagen, Valencia, CA)从肾皮质中分离RNA。F107 金属硫蛋白缺乏会加重糖尿病肾病(日本，东京)和FastStart SYBR Premix Ex Taq ll(日本，大津， Takara Bio)。引物是从塔卡拉生物公司买的。以 GAPDH为不变对照基因，采用比较Ct法对qRT-PCR结果进行评价。线粒体ROS检测。使用MitoTracker Red CM-H 2XRos(分子探针，Eugene,OR)和MitoTracker Green FM(分子探针)检测线粒体ROS。简单地说，将肾切片与10 M MitoTracker Red CM-H2XRos和MitoTracker Green FM在室温下孵育1小时。然后去除未结合的染料，使用荧光显微镜(BX51;奥林巴斯，东京，日本)。细胞培养和处理。小鼠近端小管上皮(mProx24)细胞由Takeshi Sugaya博士(CMIC)慷慨提供，并按照先前报道进行培养(21)。 mProx24细胞在添加5。5mMd-葡萄糖(低糖)，10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，100 mg/ml链霉素，2mMI-谷氨酰胺。siRNA实验采用MT siRNA(sc-35926;Santa Cruz Biotechnology)和打乱的siRNA(sc-37007;圣克鲁斯生物技术公司)。mProx24细胞转染12。5nM MT siRNA或在Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen)存在下搅乱的siRNA。siRNA转染24小时后，用25 mMd-葡萄糖(高糖)刺激细胞24小时。单个实验至少重复三次，不同批次或不同制备的细胞。mProx24细胞中基因表达的定量分析。使用如上所述的RNeasy Mini试剂盒(Qiagen)从细胞中制备总RNA。如上所述，采用qRT-PCR检测mProx24细胞中Nox4、MCP-1、TGF-*、OPN mRNA表达水平。 ELISA。肾组织和mProx24细胞中的MT-1/2水平通过 ELISA系统(Frontier Science, Ishikari, Japan)根据制造商的协议进行检测。统计分析。所有值均为平均值 SE。采用单因素方差分析和scheff<s:1>检验对组间差异进行统计学分析。AP值00。0.05认为有统计学意义。结果STZ对MT X/X小鼠的肾损害比MT<s:2>/X小鼠更大。代谢数据汇总于表1。糖尿病小鼠的UAE明显高于非糖尿病小鼠。此外，与糖尿病MT /X小鼠相比，注射STZ后12周，糖尿病MTX/X小鼠的UAE明显增加(120。66 ↑66对92。92 ↑76克/天;P0 0。05).与非糖尿病小鼠相比，糖尿病小鼠糖化血红蛋白和相对肾重增加，体重降低。糖尿病MT与糖尿病MT X/X小鼠的糖化血红蛋白、相对肾重和体重均无显著差异。 STZ在MT X/X小鼠中诱导的间质纤维化较MT mt4/ mt4小鼠更为严重。分离肾脏，并使用PAM染色、马松三色染色和IV型胶原和纤维连接蛋白的免疫荧光进行病理分析(图1A)。经PAM和IV型胶原染色显示，注射STZ后，MT/MT /X/X小鼠肾小球明显肥大，系膜基质明显扩张。然而，PAM和IV型胶原蛋白阳性区域的形态计量学分析显示，MT X/X和MTMT/C之间没有显著差异(图1、B和C)。58↑0.13 vs.2。18↑0.16%;P0 0。05)(图1D)。纤维连接蛋白的免疫荧光染色和Western blotting也显示出相同的趋势(图1、 E和F)。此外，胰岛素治疗可以减轻糖尿病MT X/X小鼠的间质纤维化，表明stz诱导的糖尿病小鼠间质纤维化是由高血糖介导的(图1、G和H)。综上所述，这些结果表明MT缺乏加速了stz诱导的糖尿病间质纤维化。与糖尿病MT/X小鼠相比，糖尿病MT X/X小鼠间质巨噬细胞浸润增加。糖尿病小鼠肾小球和间质中巨噬细胞的数量明显高于非糖尿病小鼠(图2A)。 MT X/X和MT MT /X小鼠对STZ治疗后的肾小球内巨噬细胞浸润没有差异(图2B)。然而，与糖尿病MT相比，糖尿病MTX/X小鼠的间质内巨噬细胞浸润增X小鼠中NF-B的表达增加(图4E)。总的来说，这些数据表明MT缺乏加速了糖尿病诱导的巨噬细胞募集和肾脏炎症基因表达。与糖尿病MT X/X小鼠相比，糖尿病MT X/X小鼠肾脏ROS生成增加。为了评估肾脏的氧化应激，对肾脏切片进行4-HNE免疫染色。这表明，ROS主要在糖尿病MT/X/X小鼠的小管上皮细胞中产生，在非糖尿病MT /X/X小鼠的间质中产生较少(图5A)。此外，我们使用MitoTracker Red cm -h2 XRos和MitoTracker Green FM染色来评估线粒体ROS的产生。与糖尿病MTX/X小鼠相比，糖尿病 MT X/X小鼠的MitoTracker Red cm -h2XRos强度更高(图5B)。这些发现表明，MT缺乏增加了糖尿病诱导的肾间质线粒体ROS。糖尿病MT X/X小鼠线粒体形态恶化。为了证实MT对产生线粒体ROS的有益作用，我们使用电子显微镜更详细地检查了肾脏形态。与非糖尿病MT小鼠相比，糖尿病MT小鼠的肾近端小管细胞肿胀的线粒体数量增加，嵴也明显减少，与糖尿病MT小鼠相比，糖尿病MT X/X小鼠的线粒体数量进一步增加(图6)。这些结果表明，MT缺乏损害了糖尿病肾脏近端小管上皮细胞的线粒体功能。敲除MT可增加培养的近端小管上皮细胞中ROS和炎症基因的表达水平。小鼠mProx24肾近端小管上皮细胞转染MT siRNA或乱序siRNA作为对照，并进行 qRT-PCR和ELISA分析。与对照细胞相比，MT敲低细胞中MT mRNA和蛋白的表达明显受到抑制(图7、A和 B)。MT敲低细胞中高糖诱导的Nox4mRNA表达增加(图7C)。为了评估mProx24细胞中的线粒体ROS，我们使用MitoTracker Red cm- h2 XRos和MitoTrackerGreen FM进行双重染色。转染MT siRNA的mProx24细胞中，MitoTracker Red cm -h2XRos的强度增加(图7G)。同样，MT RNAi上调MCP-1、TGF-输出、 OPN等炎性基因的表达水平(图2)。 F110 金属硫蛋白缺乏会加重糖尿病肾病7,d-f)。这些发现表明，MT的下调会加剧高糖诱导的肾近端小管上皮细胞的氧化应激和炎症。 讨论 在本研究中，我们证明MT缺乏加速了stz诱导的糖尿病小鼠的蛋白尿和间质纤维化，但不影响血糖水平。糖尿病MT X/X小鼠肾间质巨噬细胞浸润增加，炎症基因MCP-1、TGF-;)和OPN表达增加。此外，糖尿病 MT X/X小鼠线粒体ROS增加，线粒体断裂。对近端小管上皮细胞的体外研究表明，MT的下调增加了与氧化应激相关的Nox4的表达和炎症基因的表达。我们的研究结果表明，MT在糖尿病肾脏中具有抗氧化和抗炎作用，并独立于血糖水平阻止糖尿病肾病的发展。MT包括一个低分子量、富含半胱氨酸、普遍存在和可诱导的细胞内蛋白家族，它们与重金属(如锌、铜和镉)结合，并参与金属稳态和解毒(1)。哺乳动物MT家族包括四种亚型:MT-1、MT-2、MT-3和 MT-4。MT-3主要是脑特异性的，在神经元和受刺激的神经胶质细胞中表达(16)，而MT-1/2这两种主要亚型在大多数器官中表达。然而，MT在肾脏中的表达尚不清楚。这项研究和我们最近的研究表明，MT-1/2在糖尿病小鼠(图3)和大鼠(21)的肾近端小管上皮细胞中被高度诱导。这项研究还表明，MT以前曾被报道为一种有效的抗氧化剂;保护细胞免受氧化损伤(2,5,9,17,18)。因此，我们假设MT可能作为一种抗氧化蛋白在肾脏中被诱导，从而保护肾脏免受糖尿病诱导的ROS和炎症的影响。许多研究已经提出氧化应激在糖尿病肾病发病机制中的重要作用(3,11,29)。我们通过评估线粒体ROS的产生来评估肾脏的氧化应激。F111 金属硫蛋白缺乏加剧糖尿病肾病糖尿病MT/小鼠。电镜下还显示，与糖尿病MT X/X小鼠相比，糖尿病 MT X/X小鼠近端小管上皮细胞线粒体肿胀更为严重。据报道，线粒体形态在包括糖尿病肾病在内的肾脏疾病中发生改变(8,31,32)。由于MT是一种有效的抗氧化剂和适应性蛋白，可以保护细胞和组织免受氧化应激(12)，我们推测MT缺乏可能导致糖尿病 MT X/X小鼠线粒体肿胀增加。但MT与线粒体形态的关系尚未见报道，有待进一步研究。我们还进行了siRNA实验，以探索MT对Nox4基因表达水平的影响，作为ROS生成的启动子，以及对培养的近端小管上皮细胞线粒体ROS的影响。敲除MT可增加Nox4的表达和MitoTracker Red cm-h2XRos的强度，这表明MT可能通过减少近端小管上皮细胞的氧化应激来阻止Nox4衍生ROS的产生。总之，这些结果表明MT缺乏会增加糖尿病引起的肾间质氧化应激。炎症也与糖尿病肾病的发展有关(13,15,19)。本研究发现，糖尿病MT X/X小鼠中巨噬细胞标志物CD14、趋化因子 MCP-1、细胞因子TGF->和OPN的表达水平升高。同样，与糖尿病MT /X小鼠相比，糖尿病MT X/X小鼠的间质内巨噬细胞浸润和间质纤维化增加。然而，巨噬细胞在肾小球中的浸润和系膜基质的积累在两种类型的小鼠中相似。此外，体外研究表明，敲除MT可提高培养的近端小管上皮细胞中MCP-1、TGF-输出、 OPN等炎症基因的表达水平。这些结果表明，在糖尿病肾病中，MT缺乏涉及间质炎症，而不是肾小球炎症。与糖尿病MT X/X小鼠相比，炎症基因的主要调节因子NF-B在糖尿病MTX/X小鼠中的表达增加。提示MT可能通过抑制NF-B抑制高糖诱导的炎症。我们和其他人(14,27)已经证明MT在MT敲除小鼠中镉或顺铂诱导的慢性肾损伤模型中起保护作用，但尚未报道MT敲除小鼠糖尿病肾病的实验模型。虽然我们之前已经证明stz诱导的糖尿病大鼠肾脏中MT表达上调(21)，但MT是否能预防糖尿病诱导的氧化应激和炎症，从而预防糖尿病肾病，尚不清楚。足细胞特异性 MT转基因小鼠表明，足细胞中MT的过表达可以改善糖尿病肾病的主要特征(33)，这表明保护足细胞可以抑制糖尿病肾病。通过补充锌诱导肾小管MT合成也可以通过对抗氧化应激来预防糖尿病肾病(23,28)。我们目前和以前的研究(21)表明，MT主要在糖尿病肾脏的肾小管而不是足细胞中被诱导。因此，肾近端小管上皮细胞中的MT可能是治疗糖尿病肾病的治疗靶点。总之，我们证明MT缺乏加速了高糖诱导的肾脏化应激和炎症。本研究结果表明，MT作为抗氧化蛋白在保护肾脏免受糖尿病应激中起重要作用。我们的发现提示MT可能是治疗糖尿病肾病的一个新的治疗靶点。
微医药 2024-03-21阅读量1802